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抗体或蛋白如何保存?

2/3/2016 11:33:00 AM

抗体或蛋白如何保存?

 

抗体或蛋白作为蛋白质试剂,保存条件是非常重要的。只要条件得当,抗体或蛋白一般都可以保存几个月到几年。

保存温度

对于我们的大部分抗体或蛋白而言,分装为小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下冻存是最佳的长期保存条件。此外,在收到抗体或蛋白后,也可暂时保存至4℃冰箱中,短期保存时间为1-2周。也有一小部分抗体或蛋白适合长期保存于4℃冰箱。

分装前应先离心沉降挂在管壁和管盖上的抗体或蛋白,分装量取决于您的实验常用量,但建议不能少于10μl,以避免蒸发等带来的干扰。分装后的抗体或蛋白试剂应尽量避免反复冻融,可短时间(1-2周)保存于4℃冰箱中。

反复冻融可能使抗体或蛋白变性,导致抗体或蛋白形成聚集体,从而降低其结合能力。对大部分抗体或蛋白而言,在-20 ℃下保存就已足够;在-80 ℃下保存并无明显优势。保存抗体或蛋白要避免使用无霜冰箱,因为冻融循环(用于减少霜的形成)会造成抗体或蛋白反复冻融而失活。

部分抗体或蛋白试剂中会加入终浓度40%-50%的甘油使其在-20℃下保持溶液状态,从而降低冻融损伤。此类抗体或蛋白产品请勿储存于-80℃冰箱中,否则仍会凝固。值得注意的是,抗体或蛋白在加入甘油后容易被细菌污染,操作时应小心,确保无菌。

以下是一些需要注意的常见特例:

部分酶偶联抗体或蛋白,需要保存在 4 ℃,这些抗体或蛋白经历冻融不仅会影响抗体或蛋白的结合能力,还会降低酶活性。
偶联抗体或蛋白(无论是偶联有荧光染料、酶还是生物素)应尽量保存在深色样品瓶中或用锡箔纸包裹样品瓶。暴露于光下会影响偶联物的活性。荧光偶联物尤其容易发生光致漂白,因此在实验各阶段都应避光。
IgG3 同型抗体或蛋白的独特之处在于其解冻后容易形成聚集体,因此应始终保存在 4 ℃。
腹水液中可能含有蛋白酶,因此收到后应尽快冻存。
 

防止降解

抗体或蛋白试剂稀释至工作浓度后,建议及时使用,不建议对稀释后的抗体或蛋白进行长时间保存。如果必须保存,建议保存于4℃并于一周以内使用。一般而言,蛋白质浓度高于1mg/ml时更不容易降解,因此部分抗体或蛋白试剂中加入了牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂来防止降解。加入的蛋白质还能尽可能减少抗体或蛋白结合到容器壁上造成的损失。

需要注意的是,请勿向将要进行偶联的抗体或蛋白中加入蛋白质稳定剂,因为蛋白质稳定剂会与抗体或蛋白竞争,降低偶联效率。

 

防止污染

为了防止微生物污染,可将叠氮化钠作为抗菌剂加入抗体或蛋白工作液中,保持最终浓度为 0.02% (w/v)。阿拉丁的多款抗体或蛋白中都含有叠氮化钠,浓度范围为 0.02%-0.05%。抗体或蛋白数据表的保存缓冲液部分对此有说明。

此外,如果要对活细胞进行染色或处理,或进行体内研究时,请务必使用不含叠氮化钠的试剂。抗菌剂会阻断细胞色素电子传递系统,对大部分生物体都有毒害作用。

高浓度的叠氮化钠会干扰涉及胺基的所有偶联反应,因此必须在进行偶联反应之前将其去除。或可选用0.01%硫柳汞钠(硫柳汞),这种抗菌剂不含伯胺。

抗体或蛋白溶液中的叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da(IgM 约为 600,000 Da),叠氮化钠的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微透析装置可去除叠氮化钠。

透析过程在烧杯中(置于磁力搅拌器上,温度保持 4 ℃)进行,每毫升抗体或蛋白使用至少 1 升预冷的 PBS,搅拌透析装置 6 小时。更换 PBS 两次,每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能,所有材料都应灭菌,并且应在无菌条件下处理所得制备物。

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